O Mastino Napoletano é um cão muito amoroso, que quer sempre ficar perto de seus donos, recebendo carinho e brincando. É também um animal muito inteligente, assimilando com facilidade tudo o que lhe é ensinado. É um cão equilibrado, de movimentação segura e tranqüila, que age silenciosamente e quase não late. Não é comum ver um Mastino Napoletano latindo de forma espalhafatosa. Ele é encontrado geralmente em posição de descanso, somente se manifestando ou se movimentando de acordo com as ordens do seu mestre.

É um cão generoso, muito afável, brincalhão e confiável com crianças e com pequenos cães. Há apenas um pequeno problema: devido ao seu tamanho e peso exagerado (pode superar os 100 kg) pode, sem querer, machucá-las ou assustá-las. Imaginem esta raça num momento de excitação abanando o rabo e batendo no rosto de uma criança. Este é o único inconveniente com crianças muito pequenas.

É um cão tranqüilo, que ama preguiçar. Não é impulsivo nem agressivo sem razão, mas quando é necessário, sabe lutar como nenhum outro e intervir com decisão e grande coragem, protegendo seu dono e a família com determinação.

Seu temperamento equilibrado une uma guarda muito eficaz a um cão de companhia como poucos. Muitos proprietários e criadores afirmam que quem tem um Mastino Napoletano nunca mais quer outro cão. Preferências à parte, o fato é que o Mastino é dono de uma personalidade muito estável e não se tem notícia de nenhum exemplar envolvido em agressão a pessoas da própria casa onde vive. Essa raça protege não apenas o seu dono, mas toda a família com a qual convive e à qual tem extrema fidelidade. Dedica-se com docilidade e paciência a todos os membros da família, em especial às crianças.

É exímio cão de guarda, que prescinde de qualquer tipo de adestramento, pois ele é guarda há mais de dois mil anos e já aprendeu a fazer isto muito bem. O Mastino sabe distinguir o mal-intencionado, característica que os napolitanos chamam de "cussienza", ou seja, a inata sensibilidade ao perigo e a capacidade de reconhecer amigos e inimigos. Não lhe agrada entrar em briga sem razão, mas se for provocado, não deixa que violem a sua dignidade. Na guarda da casa, de lojas e mercadorias, é um protetor tenaz e corajoso, porque prefere morrer a permitir que sejam violadas as coisas confiadas à sua vigilância.

Para delimitar o território que lhe será destinado à guarda, ele fareja todo o local durante os dois primeiros dias, marca os cantos com urina, circula sem correr pelo ambiente ao qual se apega em demasia. Imponente, sereno, grande, forte e corajoso, ele se senta numa posição estratégica, num local de onde possa observar toda a movimentação de pessoas dentro e fora da casa, como se ele fosse o responsável único e absoluto por tudo.

Quando uma pessoa estranha se aproxima, primeiramente, ele fica alerta e tende a rosnar. Se o estranho se aproximar mais, ele se "arma" para o ataque. Se estiver deitado, ou sentado, se levanta, prepara os músculos para o ataque, retesando-os. Se o estranho insistir em avançar no território, ele salta sobre ele e o imobiliza. Se o invasor resistir, aí sim ele morde. De modo geral, o Mastino não se assusta com tiros, fogos de artifício ou trovões. Mas está sempre atento a qualquer barulho diferente próximo ao território confiado à sua guarda.

No carro, na calçada, ou em qualquer outro local a ser guardado, o comportamento do Mastino Napoletano parece ser o mesmo. Quando um estranho se aproxima, ele fica alerta, rosna, arma-se para o ataque, mas se contém se receber um comando em contrário do dono. O carro é defendido como se fosse uma continuação da casa.

Quem tiver um amigo Mastino terá um companheiro leal e devotado, de absoluta confiança e que nunca vai abandoná-lo numa situação de perigo. Eles dão a vida para proteger seu dono.